Аванта и К
Часто задаваемые вопросы о приборе Photochem
02.03.2015
В этой статье мы приводим ответы на наиболее часто задаваемые вопросы, касающиеся работы с автоматическим анализатором антиоксидантовAnalytik Jena Photochem.
1. Какой метод используется в данной системе?
Работа прибора основана на методе фотохемилюминесценции (ФХЛ). Сущность данного метода заключается в многократном увеличении скорости реакций, ведущий к образования супероксиданионных радикалов. Это достигается путем оптического возбуждения фоточувствительного субстрата с последующим образованием измеряемых радикалов. Эти радикалы частично нейтрализуются при взаимодействии с антиоксидантами, присутствующими в образце. В измеряемой ячейке оставшиеся радикалы вызывают свечение детекторного субстрата, и, таким образом, антиоксидантная способность образца точно определяется в отдельной ячейке, в которой имеется также фотоэлектроумножитель. Антиоксидантная способность образца оценивается путем сравнения со стандартами (Тролокс для жирорастворимых антиоксидантов и аскорбиновая кислота для водорастворимых антиоксидантов), после чего отображается в эквивалентных единицах стандарта.
2. Как быстро проводятся измерения при использовании Photochem?
Как правило, для водорастворимых антиоксидантов можно наблюдать лаг-фазу. Продолжительность лаг-фазы увеличивается пропорционально количеству антиоксидантов. Например, для измерения контроля требуется около 30 сек, а для измерения образцов с высоким содержанием антиоксидантов требуется намного больше времени. Однако в большинстве случаев время измерения образца не превышает 250 с.
С другой стороны, при измерение активности жирорастворимых антиоксидантов получаемые кривые несколько отличаются. Здесь определяется интегральная площадь под сигнальной кривой, поэтому время измерения для каждого измерения занимает не более 180 сек.
3. Какое количество образца требуется для анализа?
Это непосредственно зависит от самого образца, но обычно для анализа требуется в среднем 10-100 мкл. Для жидких образцов рекомендуется иметь как минимум 1 мл на случай каких-либо этапов предварительной пробоподготовки. Для твердых образцов, для которых необходима будет последующая пробоподготовка, потребуется около 100 мг образца, однако эта величина будет зависеть от стартового материала.
4. Каково минимальное и максимальное значение сигнала на приборе?
Сигнал для ACW (водо-) и ACL (жиро-растворимых антиоксидантов) должен находиться в пределах 2.8 и 4.0В. В противном случае необходимо обратиться к сервисную службу.
5. Какие требования предъявляются к метанолу, используемому в качестве Реагента 1 для жирорастворимых антиоксидантов?
Метанол, используемый в качестве Реагента 1 для ACL (жирорастворимых антиоксидантов), нужно заказывать отдельно. В протоколе для набора ACL указывается, какой метанол следует использовать. Для облегчения поиска производитель рекомендует использовать метанол фирмы VWR (www.VWR.com):
Метанол для жидкостной хроматографии LiChrosolv (кат. № 106018)
Метанол GR для анализов (кат. № 106009)
(Использование указанной марки метанола носит рекомендательный характер и не является обязательным)
6. Какое дополнительное оборудование требуется для работы на Photochem?
Пожалуйста, убедитесь, что у Вас есть следующие приспособления, которые нужны будут для последующей работы в процессе установки и работы на Photochem:
- 1 набор пипеток переменного объема - 1-10 мкл, 10-100 мкл (если возможно, то 2), 100-1000 мкл и 1000-2500 мкл
- Соответствующие наконечники для пипеток
- Реакционные пробирки для пробоподготовки (например, Eppendorf, 1.5 мл)
- Концентрированная серная кислота (нужна для стабилизации аскорбиновой кислоты для ACW метода)
- Бидистиллированная вода и метанол (по возможности качества, подходящего для ВЭЖХ), которые нужны будут для промывки
- Охладительный бокс (например, Iso-Term система от Eppendorf или просто немного льда), поскольку в процессе анализа реагенты должны содержаться в закрытой коробке на льду (4°С)